磷酸肽在生命過程中發(fā)揮重要作用,磷酸化的位置在多肽上的Tyr、Ser,Thr,。目前磷酸肽合成一般都采用磷酸化氨基酸,目前使用的都是單芐基磷酸化氨基酸。磷酸化氨基酸的連接一般采用HBTU/HOBt/DIEA方法,但是目前采用該方法合成磷酸化多肽也有缺點,特別是在合成多磷酸化多肽或氨基酸較長的多肽的時候,連接效率低,最后產品純度很低,對于這種磷酸化多肽,我們考慮采用后磷酸化方法,其合成過程就是在多肽合成結束后,選擇性脫去要標記的氨基酸的側鏈保護基,對于Tyr,Thr可以直接使用側鏈不保護的氨基酸進行反應,而Ser可以采用Fmoc-Ser(trt),在1% TFA/DCM條件下可以定量的脫除。
后磷酸化,采用雙芐基亞磷酰胺,四氮唑生成亞磷酰胺四唑活性中間體,連接到羥基上,隨后在過氧酸下氧化生成磷酰基,完成反應。
目前,多肽的磷酸化修飾方法主要有兩種:
(1)將適當保護的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中;
(2)多肽序列在樹脂上合成完后,再對其中的Ser、Tyr或Thr的側鏈羥基進行磷酸化。
1)將適當保護的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中: